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如何選擇正確內(nèi)參抗體,這些你需知道-北京博奧森生物技術(shù)有限公司
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如何選擇正確內(nèi)參抗體,這些你需知道
發(fā)表者:北京博奧森生物      發(fā)表時(shí)間:2020-3-13



內(nèi)參抗體可用于評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率,比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對(duì)照可幫助確定樣品間表達(dá)水平的差異,以判斷是由細(xì)胞裂解物的實(shí)際蛋白水平導(dǎo)致,還是由上樣量的差異導(dǎo)致。

內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中,也可以作為共染的陽(yáng)性對(duì)照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型,標(biāo)記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。



內(nèi)參抗體種類很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、Lamin B、PCNA等,其選擇常使我們困惑。本文將簡(jiǎn)單介紹選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的五項(xiàng)原則:

一、樣本種屬來(lái)源:

首先要考慮實(shí)驗(yàn)樣本來(lái)源于什么物種。

1. 哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本,通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

2. 植物來(lái)源實(shí)驗(yàn)樣本,則可以選擇plant actin、Rubisco等。

3. 其他來(lái)源樣本研究較少,所以就應(yīng)該參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

二、分子量大?。?/span>

選擇內(nèi)參抗體時(shí),應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小,一般保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5KD以上。例如,目的蛋白分子量為40KD,此時(shí)不適宜選擇β-actinGAPDH作為內(nèi)參,可以考慮選擇α-Tubulin或者β-tubulin作為內(nèi)參。

三、表達(dá)水平

選擇的內(nèi)參蛋白需要在待測(cè)樣本中是高表達(dá)的。常用的內(nèi)參蛋白是由管家基因高表達(dá)的,是細(xì)胞發(fā)育和維持細(xì)胞活力所必須的。例如,細(xì)胞核的內(nèi)參蛋白 PCNA,在 DNA S 期表達(dá),因此對(duì)于非增殖細(xì)胞不推薦使用。

四、目的蛋白表達(dá)定位

適用范圍 名稱 貨號(hào) 分子量
胞質(zhì)
beta I Tubulin bsm-33041M 50kDa
beta Tubulin bsm-33034M 50kDa
bs-4511R 50kDa
beta Actin bsm-33036M 42kDa
bs-0061R 42kDa
GAPDH bs-10900R 36kDa
bs-2188R 36kDa
bsm-0978M 36kDa
bsm-33033M 36kDa

alpha Tubunlin

bs-20496R 50kDa
bs-0159R 50kDa
Vinculin bsm-54148R 117kDa
Cyclophilin B bsm-33228M 20kDa
bsm-52473R 20kDa
核蛋白
Histone H3 bs-0349R 15-17kDa
bsm-33042M 15-17kDa
Lamin B bs-23709R 66-72kDa
bsm-33040M 66-72kDa
PCNA bs-0754R 36kDa
bsm-52347R 36kDa
bsm-33035M 36kDa
TATA binding protein TBP/TBP bsm-33227M 38kDa
YY1 bsm-52349R 46kDa
HDAC1 bs-1414R 65kDa
bsm-52080R 65kDa
膜蛋白
ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) bs-1152R 33kDa
bs-23414R 33kDa
質(zhì)膜
ATP1A1 (Sodium Potassium ATPase) bs-4255R 97-110kDa
bsm-52485R 97-110kDa
線粒體
COX4 bsm-33037M 17kDa
VDAC1 bs-1461R 32kDa
bsm-52251R 32kDa
全血/血漿/血清
Transferrin bsm-33243M 77kDa
bs-2052R 77kDa
Albumin bsm-0945M 66kDa
bs-0945R 66kDa
細(xì)胞增殖標(biāo)志物
BrdU bsm-0917M 化合物
bs-0489R 化合物
植物內(nèi)參 Plant actin bsm-33128M 42kDa
詳細(xì) 精品內(nèi)參抗體列表 點(diǎn)擊此處下載


五、表達(dá)因素

選擇蛋白表達(dá)不受實(shí)驗(yàn)變量影響的內(nèi)參。

在做多組織多細(xì)胞樣本對(duì)比表達(dá)量時(shí),最好選用 GAPDH作為內(nèi)參,因?yàn)镚APDH是代謝類蛋白,在活組織中表達(dá)比較恒定。而β-Actin和β-Tubulin是結(jié)構(gòu)蛋白,不同組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)有差異性;

而在某些細(xì)胞中,由于組織缺氧、糖尿病等因素會(huì)導(dǎo)致GAPDH的表達(dá)增高,不適合做內(nèi)參;

涉及細(xì)胞增殖的相關(guān)試驗(yàn)中,c-Jun由于自身表達(dá)變化不適合做內(nèi)參;

凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí),TBP、Lamin等也不適合作為內(nèi)參;

做誘導(dǎo)后樣本或檢測(cè)磷酸化等修飾性抗體時(shí),應(yīng)選擇結(jié)構(gòu)蛋白作為內(nèi)參,如β-Actin 和β-Tubulin;

做各種分泌液樣本的時(shí)候,如血漿、乳汁、組織液等,由于沒(méi)有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu),只能選擇一些分泌蛋白作為內(nèi)參。



內(nèi)參抗體驗(yàn)證示例











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