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β-Actin貨號(hào)：bs-0061R最為完美的Western Blot內(nèi)參表達(dá)抗體
發(fā)表者：北京博奧森生物 發(fā)表時(shí)間：2016-2-15
眾所周知，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少，前提條件是等量的蛋白上樣，才有比較的基礎(chǔ)。特別是在表達(dá)量不高時(shí)，上樣量的差別就很可能影響結(jié)果的分析。所以需要內(nèi)參做對(duì)比。
內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。在Western Blotting 實(shí)驗(yàn)中，除了需要進(jìn)行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉(zhuǎn)膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外，還需要進(jìn)行內(nèi)參的檢測(cè)，以校正蛋白質(zhì)定量、上樣過(guò)程中存在的實(shí)驗(yàn)誤差，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
有我北京博奧森生物技術(shù)公司自主研發(fā)的β-Actin肌動(dòng)蛋白（抗體）貨號(hào)：bs-0061R。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)
1.經(jīng)親和層析純化的濃縮液（或凍干粉），該抗體質(zhì)量超過(guò)國(guó)外任何公司的同種產(chǎn)品；
2.用于Western Blotting為非常清晰的一條帶稀釋比達(dá)1：400；
3.用于免疫組化表達(dá)位置準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)、效價(jià)高；
4.分子量：42Kda，根據(jù)需要可提供各種不同的包裝；
5.IgG含量為100μg/0.2ml 500ug/1ml；
6.價(jià)格僅為0.1ml/400.00元：0.2ml/650.00元人民幣；
7.只需4℃保存運(yùn)輸，有效期：-20℃液體長(zhǎng)達(dá)兩年（凍干粉狀態(tài)長(zhǎng)達(dá)5年以上）；
8.產(chǎn)品費(fèi)用低 ，性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠、易于保存；
9.該抗體適用廣泛，可用于人、羊、狗、豬、牛、兔、雞和大、小鼠等動(dòng)物種屬蛋白檢測(cè)；
在國(guó)外發(fā)表的文章中，Western Blotting 實(shí)驗(yàn)結(jié)果須進(jìn)行內(nèi)參校正已成為一種慣例。但是，國(guó)內(nèi)仍有不少科研人員在Western Blotting實(shí)驗(yàn)中忽略了內(nèi)參的使用，將蛋白濃度測(cè)定作為規(guī)范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯一方法。然而各種蛋白質(zhì)濃度定量方法，都存在局限性，不能完全準(zhǔn)確的確定各種樣品的準(zhǔn)確蛋白濃度。 蛋白質(zhì)定量以后進(jìn)行電泳時(shí)需要等量上樣，此步驟也存在操作誤差。在Western blotting實(shí)驗(yàn)時(shí)使用內(nèi)參，即可簡(jiǎn)便地對(duì)定量和上樣步驟產(chǎn)生的誤差進(jìn)行校正。此外使用內(nèi)參可以作為空白對(duì)照，檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析其實(shí)很簡(jiǎn)單：如果樣品蛋白量有限，只夠進(jìn)行一次電泳轉(zhuǎn)膜實(shí)驗(yàn)時(shí)，分別檢測(cè)樣品的內(nèi)參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量，得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對(duì)含量，再用此數(shù)值進(jìn)行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實(shí)際變化結(jié)果。如果樣品量充分，可以先檢測(cè)內(nèi)參，觀測(cè)樣品間內(nèi)參顯色條帶是否一致，根據(jù)差異大小調(diào)整各樣品的上樣量重新進(jìn)行Western Blotting實(shí)驗(yàn)，至內(nèi)參量一致為止；若內(nèi)參一致，即可進(jìn)行不同樣品間目的蛋白表達(dá)變化分析。這樣雖然麻煩一點(diǎn)，但是可以保證結(jié)果更有說(shuō)服力，更可信。畢竟我們的實(shí)驗(yàn)是一種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鳌?
